• 取白色環(huán)狀細(xì)胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復(fù)洗滌 2-3 次，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）。

 
分離圖例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，需在取樣 2h 內(nèi)進行實驗。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

 

• 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

 

• 請勿使用具有紅細(xì)胞保護成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
 
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

• 骨髓沖洗單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)

 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù)
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

 

• 本分離液依照國際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
 
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。