提供商:         上海研謹生物
服務名稱:       SILAC代謝標記定量實驗服務
規(guī)格:           實驗服務
價格：          500元
收費標準/服務周期/提供結果:
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SILAC代謝標記定量實驗服務
 
實驗技術簡介: SIL AC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應氨基酸，細胞經(jīng)5-6個倍增周期后，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進行質譜鑒定，根據(jù)一級質譜圖中兩個同位 素型肽段的面積比較進行相對定量。屬于體內代謝標記法。
實驗操作流程:
1、蛋白提取和樣品制備
2、標記效率測試
3、樣品混臺
4、SDS-PAGE分級
5、酶解
6、質譜鑒定
7、軟件分析
8、定性定量蛋白質組結果
9、生物信息學數(shù)據(jù)挖掘和統(tǒng)計分析
 
實驗注意事項:
客戶提供:
1、蛋白質提取物: 濃度>1μg/ul, 蛋白質總量>300μg.
2、細胞:通過細胞計數(shù)取不少于2x106個細胞于EP管，加入0 5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱(-80°C， 避免反復凍融)。
交付標準:
1、蛋白質鑒定和SIL AC定量分析結果;
2、客戶指定蛋白質對應的質譜峰圖;
3、SIL AC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。
其他:
1、SILAC是體內標記技術，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸與天然氨基酸化學性質基本相同，所標記的細胞和未標記細胞在生物學行為上幾乎沒有差異，標記效率可高達100%。
2、采用質譜定量,定量結果準確且批次變異小、重復性好。
3、體內代謝標記與SDS- PAGE或色譜分離技術相結合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質限制。
4、多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定,后續(xù)實驗對樣品的影響一致， 減少了實驗操作和儀器設備產(chǎn)生的影響。
5、由于該技術屬于體內標記，標記效果穩(wěn)定，其標記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進行全細胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。
6、與化學標記相比，SIL AC方法蛋白需要量明顯減少，通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量。
7、活體標記，更接近樣品真實狀態(tài)。
8、只適用于活體培養(yǎng)的細胞，對于生物醫(yī)學研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析,對于動物模型的標記成本太大，無法實現(xiàn)。與體外標記技術相比，SIL AC屬于體內標記，具有以下技術優(yōu)勢
1、高通量，可同時鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質;
2、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實驗差異;
3、線性定量范圍廣;
4、靈敏度更高，蛋白質需要量明顯減少;
5、標記采用的是體內標記技術，更接近樣品真實狀態(tài)。
SILAC技術服務內容
1、細胞同位素標記;
3、SDS-PAGE分離;
4、胰酶酶切后液相分離和質譜分析;
5、數(shù)據(jù)庫檢索及蛋白質定量分析;
6、差異蛋白的生物信息學分析;
7、實驗報告提交。
實驗服務報告內容
1、蛋白定鑒定和SIL AC定量分析結果;
2、顧客指定蛋白質對應的質譜峰圖;
3、SIL AC實驗完整的實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。
技術服務優(yōu)勢
1、靈敏度高，檢測限低，可檢測出低豐度蛋白;
2、分離能力強，分析范圍廣，iITRAQ可以對任何類型的蛋白質進行分離鑒定，包括高分子量蛋白質、酸性蛋白和堿性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白;
3、高通量:同時對8個樣本進行分析，提高了實驗通量，可同時對多個時間點或不同處理的蛋白質進行分析;
4、結果可靠:定性與定量分析結果更加可靠;
5、自動化程度高:液相與質譜連用，自動化操作，分析速度快，分離效果好。
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